怎么保證熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè)的溫度？
熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè)中重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強(qiáng)度；各種試劑pH是否符合要求直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。
如何保證熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè)操作中的溫度呢？
對(duì)于該問(wèn)題*的措施是使用一些FISH的儀器進(jìn)行操作。如果是手工操作，首先要對(duì)FISH操作過(guò)程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控能力的檢查，諸如水浴鍋、孵箱，對(duì)其中不符合要求的要進(jìn)行更換（疾病診斷中的探針要求溫控精度在1度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對(duì)于在冬季進(jìn)行的FISH操作尤為重要。此外對(duì)于需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)溫。同時(shí)檢測(cè)的樣本不能超過(guò)4塊。操作中的行動(dòng)一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不多（10ul），因此事先沒有預(yù)熱的蓋玻片會(huì)使得雜交液的溫度急劇下降嚴(yán)重地影響了探針和目標(biāo)DNA的雜交效率。因此對(duì)上述小部件的預(yù)熱也能有效地提高FISH的雜交效果。使用熒光顯微鏡觀察結(jié)果時(shí)，初有清晰而明亮的信號(hào)。但隨后信號(hào)急劇衰減。幾分鐘后信號(hào)就消失了。正常情況下，商業(yè)化探針即使是雜交后，如果保存適當(dāng)，熒光信號(hào)能保持半年以上。出現(xiàn)上述情況主要的原因是操作觀察的過(guò)程中或是探針的保存過(guò)程中沒有采取嚴(yán)格的避光措施。陽(yáng)光或是強(qiáng)的燈光都會(huì)使熒光染料發(fā)生急劇的淬滅，從而造成了觀察結(jié)果的不穩(wěn)定。因此在操作和觀察時(shí)，盡可能在暗室中操作。也可以在封片觀察時(shí)加入一定的antifade（抗淬滅劑）以延緩熒光素的淬滅。
